R = 1.22 /2nsin()=0.61 NA
Where R is the resolution, is the light wavelength, n is the refractive index, and θ is the half angle of the acceptance light cone (NA is the numerical angle defined as sin(θ)). For example, a microscope objective that works with visible light, with air surrounding the sample, and an acceptance half-angle cone of 72-degrees, will have a minimum resolution of 256 nm. If we surround the sample in a liquid with a refractive index of 1.5, our resolution will improve to 171 nm.
在之前的计算中,我假设接受角度为72度,在使用空气时有一个合理的上限(这个角度给我们的NA为0.95)。然而,通过将样品和显微镜浸泡在油或其他液体中,可能会有更大的NA。这不仅会影响图像的分辨率,还会影响图像的亮度(亮度是其NA的平方)。
物镜中的光学元件
物镜可以只有几个镜头单元(例如,一个消色差镜头和简单镜头),也可以有多个镜头组。即使两个放大率相同的显微镜物镜也可以有完全不同的设计,如图1所示。
显微镜物镜将显示制造商(图中没有显示),然后是像差校正的类型;在我们的图像中,我们有一个“平面图消色差图”,它在图像平面上产生一个平面,消色差图表示色差的类型。另一个规范可以是“Plan Fluor”(萤石)和“APO”(复消色度)。接下来是放大倍率、数值孔径和浸没介质。如前所述,干物镜的NA通常不大于0.95,但在浸泡物镜中,这个数字可能会高得多。接下来我们有一个无限符号,意思是透镜是∞纠正.在物镜不适合用于无限校正显微镜的情况下,会有一个数字,通常是160,表示显微镜管的长度。一些显微镜的物镜会显示字母“DIN”,代表“德意志工业诺曼”,长度为160毫米。